Fandom

VroniPlag Wiki

Analyse:Sw/Fragment 045 03

31.351Seiten in
diesem Wiki
Seite hinzufügen
Diskussion0

Störung durch Adblocker erkannt!


Wikia ist eine gebührenfreie Seite, die sich durch Werbung finanziert. Benutzer, die Adblocker einsetzen, haben eine modifizierte Ansicht der Seite.

Wikia ist nicht verfügbar, wenn du weitere Modifikationen in dem Adblocker-Programm gemacht hast. Wenn du sie entfernst, dann wird die Seite ohne Probleme geladen.


Typus
Verschleierung
Bearbeiter
Hindemith
Gesichtet
No.png
Untersuchte Arbeit:
Seite: 45, Zeilen: 3-7, 14-24
Quelle: Ruf_2007
Seite(n): 40, 41, Zeilen: 40: 17ff; 41: 1ff
3.7.4.2.2. Real-time PCR-Ansatz

Um Pipettierfehler und Kontaminationsgefahren zu vermeiden und den Arbeitsaufwand gering zu halten wurde bei der real-time PCR ein Supermix der Firma Bio-Rad verwendet, welcher bereits alle wichtigen Ingredienzien in der richtigen Konzentration enthielt.

PCR-Reaktionsansatz/Probe:

iQ™ SYBR® Green Supermix 25 μl

fw-Primer 0,3 μl (100 μmol/l)

rev-Primer 0,3 μl (100 μmol/l)

aqua bidest. 6,4 μl

DNA-Template (1:10) 3 μl

Σ 20 μl/Probe

Es wurde für jede Probe eine Doppelbestimmung durchgeführt. Als Laufkontrolle galt der Ansatzmix ohne Template. Alle Arbeitsschritte erfolgten im Eisbad bei 0° bis 4°C.

3.7.4.2.3. PCR-Laufprogramme

Die DNA-Synthese erfolgte im Wesentlichen in drei Schritten. Jeder Zyklus bestand aus einem Denaturierungsschritt bei 95°C, um die beiden DNA-Stränge voneinander zu trennen, einem Hybridisierungsschritt, in dem die beiden Primer an den jeweils komplementären Strang binden und einem Syntheseschritt, während dessen der zwischen den Primern liegende DNA-Abschnitt mit Hilfe der DNA-Polymerase und der im Reaktionsmix vorhandenen Desoxyribonukleotide selektiv synthetisiert wurde. Während jedes PCR-Zyklus sollte sich demnach die Menge der spezifischen DNA [Abschnitte verdoppeln.]

Real time RT-PCR-Ansatz

Es wurde für die real time RT-PCR eine vorgefertigte Reaktionsmischung (Supermix®) der Firma Bio-Rad verwendet, um Pipettierfehler und Kontaminationsgefahren zu vermeiden und den Arbeitsaufwand gering zu halten. Dieser Supermix® enthielt bereits alle wichtigen Ingredienzien in den benötigten Konzentrationen. Es wurden die Primer, aqua bidest. und die verdünnte cDNALösung (DNA-Template) hinzugefügt.

[Seite 41]

PCR-Reaktionsansatz je Probe:

iQ™ SYBR® Green Supermix 10 μl

fw-Primer 0,3 μl (100 μmol/l)

rev-Primer 0,3 μl (100 μmol/l)

aqua bidest. 6,4 μl

DNA-Template (1:10) 3 μl

Σ = 20 μl/Probe

Es wurde für jede Probe eine Doppelbestimmung durchgeführt. Als Laufkontrolle galt der Reaktionsansatz ohne Template. Alle Arbeitsschritte erfolgten bei max. 4°C.

PCR-Laufprogramme

Die DNA-Synthese erfolgt in drei Schritten: Denaturierung, Hybridisierung (Annealing) und Synthese (Amplifikation). Jeder Zyklus besteht somit aus einem Denaturierungsschritt bei 95°C, in dem die beiden DNA-Stränge voneinander getrennt werden, einem Hybridisierungsschritt, in dem die beiden Primer an den jeweils komplementären Strang binden und einem Syntheseschritt, während dem der zwischen den Primern liegende DNA-Abschnitt mit Hilfe der DNA-Polymerase und der im Reaktionsmix vorhandenen Desoxyribonukleotide selektiv synthetisiert wird. In jedem PCR-Zyklus sollte sich demnach die Menge der spezifischen DNA-Abschnitte verdoppeln, [...]

Anmerkungen

Ein Quellenverweis fehlt. Die Probenzusammensetzung mag durchaus identisch sein, die beschreibenden Worte sollten es nicht sein, ohne dass die Quelle genannt ist. Man beachte auch, dass in der Quelle die Summe 20 μl/Probe korrekt ist, in der untersuchten Arbeit aber nicht.

Sichter
(Hindemith)

Auch bei Fandom

Zufälliges Wiki