von Dr. Sandro Lorenz
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[1.] Slo/Fragment 056 08 - Diskussion Zuletzt bearbeitet: 2014-07-17 20:27:48 WiseWoman | Fragment, Gesichtet, SMWFragment, Schurek 2007, Schutzlevel sysop, Slo, Verschleierung |
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Untersuchte Arbeit: Seite: 56, Zeilen: 8-21 |
Quelle: Schurek 2007 Seite(n): 38, Zeilen: 13ff |
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3.2.3 SDS-Polyacrylamid-Gelelektrophorese (SDS-PAGE)
(Laemmli, 1970) Um Proteine nach ihrer molekularen Größe aufzutrennen, werden SDSPolyacrylamidgele (SDS-PAA-Gele) mit diskontinuierlichem Puffersystem verwendet. Trenn- und Sammelgele werden nach den in Tabelle 3.2 angegebenen Rezepturen hergestellt. Die Lösung für das Trenngel wird in eine Gelkassette gegossen und mit Isopropanol überschichtet. Nach dem das Trenngel vollständig polymerisiert ist, wird das Isopropanol entfernt. Das Sammelgel wird gegossen und ein Plastikkamm mit der gewünschten Anzahl an Taschen platziert wird. Bevor das Gel mit den Proteinproben beladen wird, werden diese in Laemmli- Probenpuffer für 5 Min bei 95 °C denaturiert. Ein Proteingrößenstandard (Marker, Precision Plus Protein Dual Colour Standard, BioRad) wird neben den Proben aufgetragen. Die Elektrophorese erfolgt bei 10 mA im Sammelgel und 20 mA im Trenngel unter Verwendung von 1x Protein-Laufpuffer. Tabelle 3.1 Rezepturen für SDS-PAA-Gele |
3.2.4 SDS-Polyacrylamid-Gelelektrophorese (SDS-PAGE)
(Laemmli, 1970)[47] Um Proteine nach ihrer molekularen Größe aufzutrennen, werden SDS-Polyacrylamidgele (SDS-PAA-Gele) mit diskontinuierlichem Puffersystem verwendet. Trenn- und Sammelgele werden nach den in Tabelle 3.2 angegebenen Rezepturen hergestellt. Die Lösung für das Trenngel wird in eine Gelkassette gegossen und mit Isopropanol überschichtet. Nachdem das Trenngel vollständig polymerisiert ist, wird das Isopropanol entfernt. Das Sammelgel wird auf das Trenngel gegossen. Ein Plastikkamm mit Aussparungen für die spätere Proteinbeladung wird in das Sammelgel platziert. Bevor das Gel mit den Proteinproben beladen wird, werden diese in Laemmli-Probenpuffer für 5 Min bei 95°C denaturiert. Ein Proteingrößenstandard (Marker, Precision Plus Protein Dual Colour Standard, Biorad) wird neben den Proben aufgetragen. Die Elektrophorese erfolgt bei 175 V im Sammelgel und 200 V im Trenngel unter Verwendung von 1 x Protein-Laufpuffer. Tabelle 3.2 Rezepturen für SDS-PAA-Gele [...] |
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