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Quelle: Cervello 2009 Seite(n): 49, 50, Zeilen: 49: 17 ss.; 50: 1 ss. |
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| [Otros métodos, raramente empleados en la técnica de la PCR,] serían la adición de sales o agentes químicos capaces de realizar la desnaturalización.
2. Unión del cebador. A continuación se producirá la hibridación del cebador, es decir, el cebador se unirá a su secuencia complementaria en el ADN molde. Para esto es necesario que la temperatura descienda (generalmente, a 55 ºC, aunque se puede variar según sea el caso entre 45ºC y 65ºC). Estos cebadores actuarán como límites de la región de la molécula que va a ser amplificada. 3. Extensión de la cadena. Por último actúa la ADN polimerasa, tomando el ADN molde para sintetizar la cadena complementaria y partiendo del cebador como soporte inicial necesario para la síntesis de nuevo ADN. Se aumenta la temperatura hasta 72 ºC (para la ADN Polimerasa), temperatura a la cual la Taq pol presenta su máximo de actividad, aumentando geométricamente la cantidad de fragmentos de ADN amplificados en la reacción.
Figura 8. Fases de la PCR-semicuantitativa Una vez completados todos los ciclos, se finaliza con dos pasos, uno de extensión de la cadena a la temperatura óptima de esta ADN polimerasa, [normalmente 72ºC, para finalizar enfriando la muestra a 4ºC para su mantenimiento.] |
Otros métodos, raramente empleados en la técnica de la PCR, serían la adición de sales o agentes químicos capaces de realizar la desnaturalización.
2. Unión del cebador. A continuación se producirá la hibridación del cebador, es decir, el cebador se unirá a su secuencia complementaria en el ADN molde. Para esto es necesario que la temperatura descienda (generalmente, a 55 ºC, aunque se puede variar según sea el caso entre 45ºC y 65ºC). Estos cebadores actuarán como límites de la región de la molécula que va a ser amplificada. 3. Extensión de la cadena. Por último actúa la ADN polimerasa, tomando el ADN molde para sintetizar la cadena complementaria y partiendo del cebador como soporte inicial necesario para la síntesis de nuevo ADN. Se [página 50] aumenta la temperatura hasta 72 ºC (para la ADN Polimerasa), temperatura a la cual la Taq pol presenta su máximo de actividad, aumentando geométricamente la cantidad de fragmentos de ADN amplificados en la reacción.
Figura 8. Fases de la PCR-semicuantitativa Una vez completados todos los ciclos, se finaliza con dos pasos, uno de extensión de la cadena a la temperatura óptima de esta ADN polimerasa, normalmente 72ºC, para finalizar enfriando la muestra a 4ºC para su mantenimiento. |
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