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Hw/Fragment 016 01

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Typus
Verschleierung
Bearbeiter
Hindemith
Gesichtet
Yes.png
Untersuchte Arbeit:
Seite: 16, Zeilen: 1ff (komplett)
Quelle: Blume 2003
Seite(n): 108, Zeilen: 1ff
Hw 16a diss.png

Abbildung 6: Prinzip der QuickChangeTM Site-Directed-Mutagenesis.

Doppelsträngige Plasmid-DNA wird bei 95 °C denaturiert, so daß sich nach dem Auftrennen der Doppelstrang-DNA Oligonukleotidprimer, mit der einzuführenden Mutation, anlagern können. Ausgehend von diesen Primern werden von der PfuTurbo-DNA-Polymerase komplementäre Stränge synthetisiert. Anschließend wird die parentale, methylierte und nicht mutierte DNA selektiv durch die Endonuklease Dpn I abgebaut. Die circuläre, doppelsträngige DNA mit der eingeführten Mutation wird in kompetente E. coli-Zellen transformiert.

Hw 16a source.png

Abbildung 3.15: Prinzip der QuickChangeTM Site-Directed-Mutagenesis.

Doppelsträngige Plasmid-DNA wird bei 95 °C denaturiert, so daß sich Oligonukleotidprimer, die die einzuführende Mutation enthalten, anlagern können. Ausgehend von diesen Primern werden von der PfuTurbo-DNA-Polymerase komplementäre Stränge synthetisiert. Anschließend wird die parentale, methylierte und nicht mutierte DNA selektiv durch die Endonuklease Dpn I abgebaut. Die circuläre, doppelsträngige DNA mit der eingeführten Mutation wird in kompetente E. coli-Zellen transformiert.

Anmerkungen

Ein Verweis auf die Quelle fehlt.

Sichter
(Hindemith) Schumann

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