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Jis/Fragment 077 06

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Typus
Verschleierung
Bearbeiter
Hood
Gesichtet
No.png
Untersuchte Arbeit:
Seite: 77, Zeilen: 6-17
Quelle: Groß 1999
Seite(n): -, Zeilen: -
Im Gegensatz hierzu zeigte der Gelretardationsassay, bei dem eine bona fide NF-1-Bindungsstelle (Meisterernst et al., 1988) als Kompetitor verwendet worden war, keinen Einfluß auf die Bindung an die reverse CCAAT-Box hat. Um zu zeigen daß es sich bei dem mit den reversen CCAAT-Boxen interagierenden Protein tatsächlich um NF-Y handelt, wurde ein „Supershift“ mit einem polyklonalen Antikörper, der spezifisch eine Untereinheit des NF-Y (CBF-A) erkennt, durchgeführt. Spur 12 zeigt, daß bei den reversen CCAAT-Boxen der Proteinkomplex durch die Antikörper-Bindung eine geringere Mobilität erhielt, und es somit zu einer Verschiebung der Proteinbande („Supershift“) im Gelretardationsassay kam. Präimmunserum als Kontrolle hingegen führte zu keiner Veränderung der Mobilität (Spur 13). Dieser Gelretardationsassay zeigt, daß NF-Y oder ein zumindest sehr nah verwandtes Protein das mit den reversen CCAAT-Boxen interagierende Protein ist. Im Gegensatz hierzu zeigte der Gelretardationsassay, bei dem eine bona fide NF-1-Bindestelle (Santoro et al., 1988) verwendet worden war, im Vergleich zu Yc 2 einen Komplex völlig anderer Mobilität (Abb. 21). Wie in Abb. 22A und Abb. 22B gezeigt, hatte die NF-1-Bindestelle, wenn sie als Kompetitor eingesetzt wurde, auch keinen Einfluß auf die Bindung an Yc 2 bzw. Ea-Y.

[...]

Um zu zeigen daß es sich bei dem mit den Yc-Boxen interagierenden Protein tatsächlich um NF-Y handelt, wurde ein „Supershift“ mit einem polyklonalen Antikörper (Mantovani et al., 1992), der spezifisch die B-Untereinheit des NF-Y erkennt, durchgeführt. Abb. 24A und 24B zeigen, daß sowohl bei den drei Yc-Boxen als auch bei Ea-Y der Proteinkomplex durch die Antikörper-Bindung eine geringere Mobilität erhielt, und es somit zu einer Verschiebung der Proteinbande („Supershift“) im Gelretardationsassay kam. Ein unspezifischer Antikörper (Kontrolle) hingegen führte zu keiner Veränderung der Mobilität. Die gleiche Beobachtung konnte bei Verwendung eines monoklonalen Antikörpers (Mantovani et al., 1992), der gegen die A-Untereinheit von NF-Y gerichtet war, gemacht werden. Abb. 24B zeigt die Verschiebung der Proteinkomplexe an den drei Yc-Boxen und an Ea-Y unter Verwendung des monoklonalen Antikörpers. Diese beiden Beobachtungen zeigen, daß NF-Y oder ein zumindest sehr nah verwandtes Protein das mit Yc 1, Yc 2 und Yc 3 interagierende Protein ist.

Anmerkungen

Fortsetzung der Textübereinstimmungen/Anlehnungen auf der Folgeseite.

Teils wiederholende Wortwahl: Vgl. Fragment 091 01.

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