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| Untersuchte Arbeit: Seite: 53, Zeilen: 1-10 |
Quelle: Knorr 2000 Seite(n): 43, Zeilen: 1-10 |
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| [2.9.3 Proteinbestimmung nach Bradford
Die Konzentrationen von Proteinen in Lösung wird durch die Bradford-Methode bestimmt (Bradford 1976). Die Messung basiert auf der Absorption des] Farbstoffes Coomassie Brilliant Blue G-250 bei einer Wellenlänge von 595 nm in Abhängigkeit von der Proteinkonzentration. Der Farbstoff bindet an basische (Ausnahme Arginin) und aromatische Aminosäurereste. Die Eichkurve des Standardproteins BSA verschiedener Konzentration (1, 2,5,10,20,30 μg) ermöglicht die Bestimmung der Proteinkonzentration der Proben. Es wurde eine konzentrierte Bradford-Reagenzlösung (BioRadTM) verwendet, die mit H2Obidest 1:5 verdünnt wird. Die Messung der optischen Dichte (OD) erfolgte nach Mischen von 1 ml der verdünnten Farbstofflösung mit 10 μl der Proteinprobe unbekannter Konzentration. Anschließend werden die Proben für 30 min bei Raumtemperatur ins Dunkle gestellt. |
3.2.8.3 Bestimmung der Proteinkonzentration nach Bradford
Die Konzentration von Proteinen in Lösung wird durch die Bradford-Methode bestimmt (Bradford, 1976). Die Messung basiert auf der Absorption des Farbstoffes Coomassie Brilliant Blue bei einer Wellenlänge von l=595nm in Abhängigkeit von der Proteinkonzentration. Der Farbstoff bindet an basische (Ausnahme Arginin) und aromatische Aminosäurereste. Die Eichkurve des Standardproteins BSA verschiedener Konzentration (1, 2, 5, 10, 20, 30 μg) ermöglicht die Bestimmung der Proteinkonzentration der Proben. Es wird eine konzentrierte Bradford-Reagenzlösung (BioRadTM ) verwendet, die 1:5 mit H2Obidest verdünnt wird. Die Messung der optischen Dichte erfolgt nach Mischen von 1 ml der verdünnten Farbstofflösung mit 20 μl der Proteinprobe unbekannter Konzentration. |
Kein Hinweis auf die Quelle. |
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