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Msf/Fragment 053 15

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Typus
Verschleierung
Bearbeiter
SleepyHollow02
Gesichtet
Yes.png
Untersuchte Arbeit:
Seite: 53, Zeilen: 15-31
Quelle: Kamp 2003
Seite(n): 54, Zeilen: 3 ff.
In dieser Arbeit wurde der Proteingehalt auch nach der Methode von Smith bestimmt (Smith et al., 1985): Das Prinzip dieses Tests beruht auf der Reduktion von Cu2+ zu Cu+, welches dann mit Bicinchoninsäure (BCA) einen Farbkomplex bildet, dessen Entstehung photometrisch bei λ=562 nm im ELISA-Reader gemessen werden kann (siehe Schema, unten). Für die Reduktion werden die Aminosäuren Cystein, Cystin, Tryptophan und Tyrosin verantwortlich gemacht.

Von den auf ihren Proteingehalt zu bestimmenden Proben wurden Verdünnungen hergestellt. Ein Volumen von 10 μl dieser Proben wurde in Mikrotiterplatten gegeben, mit 200 μl Farbreagenz versetzt und für 30 min bei 37°C im Dunkeln inkubiert. Anschließend wurde die Extinktion bei λ=562 nm in einem ELISA-Reader bestimmt. Die Proteinkonzentration ergab sich durch Vergleich eines gleichbehandelten BSA-Standards (Konzentrationen zwischen 25 und 1500 μg/ml) mit den Proben. Der Proteingehalt einer Probe wurde zweifach bestimmt. Die Reaktion wird nicht durch Detergenzien und hohe Salzkonzentrationen, aber durch Reduktionsmittel gestört.

Lösungen:

Farbreagenz: Fa. Pierce: 50 Teile Reagenz A + 1 Teil Reagenz B

Reaktionsschema:

4.2.1.1 BCA-Methode (Smith et al., 1985)

Das Prinzip dieses Tests beruht auf der Reduktion von Cu2+ zu Cu+, welches dann mit Bicinchoninsäure (BCA) einen Farbkomplex bildet, dessen Entstehung photometrisch bei λ = 562 nm im ELISA-Reader gemessen werden kann (siehe Schema). Für die Reduktion werden die Aminosäuren Cystein, Cystin, Tryptophan und Tyrosin verantwortlich gemacht. Von den auf ihren Proteingehalt zu bestimmenden Proben wurden Verdünnungen hergestellt. Ein Volumen von 10 μl dieser Proben wurde in Mikrotiterplatten gegeben, mit 200 μl Farbreagenz versetzt und für 30 min bei 37 °C im Dunkeln inkubiert. Anschließend wurde die Extinktion bei λ = 562 nm in einem ELISA-Reader bestimmt. Die Proteinkonzentration ergab sich durch Vergleich eines gleichbehandelten BSA-Standards (Konzentrationen zwischen 25 und 1500 μg/ml) mit den Proben. Der Proteingehalt einer Probe wurde dreifach bestimmt.

Die Reaktion wird nicht durch Detergenzien und hohe Salzkonzentrationen, aber durch Reduktionsmittel gestört.

Lösungen

Farbreagenz: Fa. Pierce: 50 Teile Reagenz A + 1 Teil Reagenz B

Reaktionsschema:

Anmerkungen

Kein Hinweis auf die Quelle.

Sichter
(SleepyHollow02), Hindemith

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