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Nay/035

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mRNA-Expression vom connective tissue growth factor (CTGF) und hepatocyt growth factor (HGF) nach laserinduzierten Thermotherapie (LITT) und chirurgischer Resektion experimenteller Lebermetastasen

von Dr. Nawid Ayubi

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Statistik und Sichtungsnachweis dieser Seite findet sich am Artikelende
[1.] Nay/Fragment 035 06 - Diskussion
Zuletzt bearbeitet: 2014-08-10 15:29:15 Hindemith
Boerner 2000, Fragment, Gesichtet, Nay, SMWFragment, Schutzlevel sysop, Verschleierung

Typus
Verschleierung
Bearbeiter
Hindemith
Gesichtet
Yes.png
Untersuchte Arbeit:
Seite: 35, Zeilen: 6-26
Quelle: Boerner 2000
Seite(n): 34, Zeilen: 1ff (komplett)
2.2.7.2 Herstellung der Gefrierschnitte

Die Herstellung der Kryostatschnitte erfolgte mit dem Kryostaten Microm HM500 OM, bestehend aus einer Kryostatkammer und einem thermovariablem Mikrotom. Die Gewebeproben wurden in kryoasserviertem Zustand im Kryostatraum bei 17°C weiterverarbeitet, ohne dass die Präparate antauten. Die Gewebeproben wurden vorsichtig mit einem Skalpell von dem Phosphatpuffer (PBS, Seromed, Berlin) befreit und so präpariert, dass eine Schnittfläche entstand, die neben der Tumorinvasionsfront (Grenze zwischen Tumor- und Lebergewebe) auch Tumorgewebe und einen Anteil nicht geschädigten Lebergewebes enthielt. Anschließend wurden die Proben mit Hilfe einer tiefgekühlten Pinzette mit der Schnittfläche nach oben auf einen mit thermodynamischen Gel (Cryoembedding combound, Microm Laborgeräte GmbH) beschichteten Aluminiumblock gelegt.

Durch das Gefrieren des Gels erfolgte eine Fixierung der Gewebeprobe auf dem Aluminiumblock. Der Aluminiumblock wurde mit dem Mikrotom verbunden und die Temperatur auf 17°C eingestellt. Es wurden Schnittpräparate von 7μm Dicke hergestellt und mit einem zimmerwarmen Objektträger zur Weiterverarbeitung abgenommen.

2.2.7.2.1 Fixierung

Die fertigen Schnitte wurden in Acetonchloroform (Baker, Deventer/Holland) bei Raumtemperatur für 10 min fixiert und bei Raumtemperatur getrocknet. Anschließend wurden sie bis zum Färben bei -80°C gelagert.

4.2.6 Histologische Aufarbeitung

4.2.6.1 Herstellung der Gefrierschnitte

Die Herstellung der Kryostatschnitte erfolgte mit dem Kryostaten 2800 Frigocut N (Leica, Nußloch), bestehend aus einer Kryostatkammer und einem thermovariablem Mikrotom. Die Gewebeproben wurden in kryoasserviertem Zustand im Kryostatraum bei − 23 °C weiterverarbeitet, ohne daß die Präparate antauten. Die Gewebeproben wurden vorsichtig mit einem Skalpell von dem Phosphatpuffer (PBS, Seromed, Berlin) befreit und so präpariert, daß eine Schnittfläche entstand, die neben der Tumorinvasionsfront (Grenze zwischen Tumor- und Lebergewebe) auch Tumorgewebe und einen Anteil nicht geschädigten Lebergewebes enthielt. Anschließend wurden die Proben mit Hilfe einer tiefgekühlten Pinzette mit der Schnittfläche nach oben auf einen mit thermodynamischen Gel (Microm Laborgeräte GmbH, Walldorf) beschichteten Aluminiumblock gelegt. Durch das Gefrieren des Gels erfolgte eine Fixierung der Gewebeprobe auf dem Aluminiumblock. Der Aluminiumblock wurde mit dem Mikrotom verbunden und die Temperatur auf − 23 °C eingestellt. Es wurden Schnittpräparate von 5 μm Dicke hergestellt und mit einem zimmerwarmen Objektträger zur Weiterverarbeitung abgenommen.

4.2.6.1.1 Fixierung

Die fertigen Schnitte wurden in Acetonchloroform (Baker, Deventer/Holland) bei 4 °C für 5 Minuten im Kühlschrank fixiert und bei Raumtemperatur getrocknet. Anschließend wurden sie bis zum Färben bei − 80 °C gelagert.

Anmerkungen

Die Quelle ist hier nicht genannt.

Sichter
(Hindemith) Agrippina1


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Letzte Bearbeitung dieser Seite: durch Benutzer:Hindemith, Zeitstempel: 20140810153225

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