von Dr. Xavier Santamaria Costa
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[1.] Xsc/Fragment 044 08 - Diskussion Zuletzt bearbeitet: 2014-11-17 21:52:53 Hindemith | Cervello 2009, Fragment, Gesichtet, KomplettPlagiat, SMWFragment, Schutzlevel sysop, Xsc |
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Untersuchte Arbeit: Seite: 44, Zeilen: 8-29 |
Quelle: Cervello 2009 Seite(n): 48, 49, Zeilen: 48: 26 ss. ; 49: 1 ss. |
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Esta técnica sirve para amplificar un fragmento de ADN diana. Esta técnica se fundamenta en la propiedad natural de las ADN polimerasas para replicar hebras de ADN, para lo cual emplea ciclos a altas y bajas temperaturas alternadas para separar las hebras de ADN recién formadas entre sí tras cada fase de replicación y, a continuación, dejar que vuelvan a unirse a polimerasas para que vuelvan a duplicarlas.
Para la realización de esta técnica es necesario el diseño de cebadores para la PCR, también denominados primers, que son oligonucleótidos sintéticos que hibridan con la región que se desea amplificar y propician el inicio de la reacción de elongación por la Taq pol (ADN polimerasa). Los cebadores suelen ser secuencias cortas, de entre seis y cuarenta nucleótidos, normalmente de 18 a 22, que son reconocidos por la polimerasa permitiendo iniciar la reacción. Deben estar situados enfrentados y a no mucha distancia entre ellos (no más de 4 kb). Delimitan la zona de ADN a amplificar. La PCR semi-cuantitativa proceso tiene tres fases (figura 8): 1. Desnaturalización. En primer lugar, se desnaturaliza el ADN (se separan las dos hebras de las cuales está constituido). Este paso puede realizarse de diferentes modos, siendo el calentamiento (94-95ºC) de la muestra la forma más habitual. La temperatura a la cual se decide realizar la desnaturalización depende, entre otras cosas, de la proporción de G+C (guanina-citosina) que tenga la hebra, como también del largo de la misma. Otros métodos, raramente empleados en la técnica de la PCR, [serían la adición de sales o agentes químicos capaces de realizar la desnaturalización.] |
Esta técnica sirve para amplificar un fragmento de ADN diana. Esta técnica se fundamenta en la propiedad natural de las ADN polimerasas para replicar hebras de ADN, para lo cual emplea ciclos a altas y bajas temperaturas alternadas para separar las hebras de ADN recién formadas entre sí tras cada
[página 49] fase de replicación y, a continuación, dejar que vuelvan a unirse a polimerasas para que vuelvan a duplicarlas. Para la realización de esta técnica es necesario el diseño de cebadores para la PCR, también denominados primers, que son oligonucleótidos sintéticos que hibridan con la región que se desea amplificar y propician el inicio de la reacción de elongación por la Taq pol (ADN polimerasa). Los cebadores suelen ser secuencias cortas, de entre seis y cuarenta nucleótidos, normalmente de 18 a 22, que son reconocidos por la polimerasa permitiendo iniciar la reacción. Deben estar situados enfrentados y a no mucha distancia entre ellos (no más de 4 kb). Delimitan la zona de ADN a amplificar. La PCR semi-cuantitativa proceso tiene tres fases (figura 8): 1. Desnaturalización. En primer lugar, se desnaturaliza el ADN (se separan las dos hebras de las cuales está constituido). Este paso puede realizarse de diferentes modos, siendo el calentamiento (94-95ºC) de la muestra la forma más habitual. La temperatura a la cual se decide realizar la desnaturalización depende, entre otras cosas, de la proporción de G+C (guanina-citosina) que tenga la hebra, como también del largo de la misma. Otros métodos, raramente empleados en la técnica de la PCR, serían la adición de sales o agentes químicos capaces de realizar la desnaturalización. |
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